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熒光顯微鏡

1.廣角目鏡2.消色差物鏡4.四孔物鏡轉(zhuǎn)換器4.下降熒光裝置藍(lán)色(B)綠色(G)勵(lì)磁系統(tǒng)100W水銀燈5.同軸粗調(diào)微動(dòng)聚焦機(jī)構(gòu):聚焦范圍15 mm微動(dòng)值0.002 mm 6.雙層機(jī)械工作臺(tái)縱向移動(dòng)范圍:70 mm橫向移動(dòng)范圍:50 mm(1)滑動(dòng)玻璃滑塊厚度應(yīng)介于0.8和1.2 mm之間,坡度過厚,一方面,光吸收更多,另一方面,激發(fā)光不能聚集在試樣上。

載玻片必須光滑,厚度均勻,無自發(fā)熒光。

有時(shí)使用石英玻璃載玻片。

(2)蓋玻片蓋玻片的厚度約為0.17mm,光滑潔凈。

為了增強(qiáng)激發(fā)光,還可以使用干涉覆蓋玻璃,這是一種特殊的覆蓋玻璃,在不同波長(zhǎng)的光(如氟化鎂)上涂有幾層不同的干涉效應(yīng),可以產(chǎn)生熒光平滑。

通過并反射激發(fā)光,反射的激發(fā)光可以激發(fā)樣本。

(III)標(biāo)本組織切片或其他標(biāo)本不應(yīng)太厚。

例如,太大的激發(fā)光主要在樣本的下部消耗,而由物鏡直接觀察的上部沒有被充分激發(fā)。

另外,細(xì)胞重疊或雜質(zhì)掩蔽影響判斷。

(四)密封劑密封劑常用甘油,必須無自發(fā)熒光,無色透明,熒光亮度在pH 8.5~9.5時(shí)更亮,不易褪色。

因此,使用等量的甘油和0.5mol / l的pH為9.0至9.5的碳酸鹽緩沖液作為密封劑。

(5)鏡油通常,暗視野熒光顯微鏡和油鏡觀察樣品必須使用鏡油。

最好使用特殊的非熒光油,或使用上述甘油代替。

也可以使用液體石蠟,但折射率低。

對(duì)圖像質(zhì)量有輕微影響。

熒光顯微鏡使用具有高發(fā)光效率的點(diǎn)光源來發(fā)射特定波長(zhǎng)的光(例如紫外光3650或紫藍(lán)色4200)作為激發(fā)光,并且激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出各種顏色。

熒光后,通過物鏡和目鏡的放大觀察。

這樣,在強(qiáng)烈的對(duì)比背景下,即使熒光非常弱,也易于識(shí)別并具有高靈敏度,主要用于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能以及化學(xué)成分的研究。

熒光顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)包括常見的光學(xué)顯微鏡和一些附件(例如熒光光源,激發(fā)濾光片,雙色分束器和阻擋濾光片)。

熒光光源 - 一般使用超高壓汞燈(50-200W),可以發(fā)出各種波長(zhǎng)的光,但每種熒光物質(zhì)都有一束激發(fā)光,產(chǎn)生最強(qiáng)的熒光,所以有必要增加激發(fā)濾光片(通常,有紫外線,紫色,藍(lán)色和綠色激發(fā)濾光片),只有一定波長(zhǎng)的激發(fā)光透過被照射的樣品,其他光被吸收。

在用激發(fā)光照射每種物質(zhì)后,它在非常短的時(shí)間內(nèi)發(fā)射比照射波長(zhǎng)更長(zhǎng)的可見熒光。

熒光是特異性的并且通常比激發(fā)光弱。

為了觀察特定熒光,在物鏡后添加阻擋(或抑制)濾光器。

它有兩個(gè)功能:一個(gè)是吸收和阻擋激發(fā)光進(jìn)入目鏡,以避免干擾熒光和損害眼睛,另一個(gè)是選擇并允許特定熒光通過,顯示特定的熒光顏色。

必須選擇兩個(gè)過濾器才能使用。

1.照射模式通常為噴霧型,即光源通過物鏡投射到樣品上; 2.光源為紫外光,波長(zhǎng)較短,分辨率高于普通顯微鏡; 3.有兩個(gè)特殊的濾光片,在光源之前用于濾除可見光,目鏡和物鏡之間用于濾除紫外線以保護(hù)眼睛。

熒光顯微鏡也是一種光學(xué)顯微鏡。

主要區(qū)別在于兩者的激發(fā)波長(zhǎng)不同。

這決定了熒光顯微鏡和普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)和使用方法之間的差異。

熒光顯微鏡是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具。

它由光源的主要部件,濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)組成。

熒光被一定波長(zhǎng)的光激發(fā),并通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大,以觀察樣品的熒光圖像。

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